由江蘇昆山檢驗檢疫局和南京農業大學共同申請的“雪松疫霉根腐病菌快速分子檢測技術研究”課題日前通過專家鑒定。該研究以tRNA序列為靶點，首次應用于卵菌的鑒定，并建立了一套快速、靈敏、高效的基于PCR檢測雪松疫霉根腐病菌的方法，該研究對從GenBank中得到P.lateralis和其他疫霉種的tRNA序列進行分析，設計了一對特異性引物T1/T2，利用該引物對其他15種疫霉和其他真菌進行特異性擴增，發現只能從P.lateralis中擴增得到一條192bp的條帶，其他菌株均無擴增條帶出現，表明該對引物具有種的特異性。
在25μL反應體系中，普通的PCR方法能檢測到10pg P. lateralis基因組DNA，而該研究的體系中采用套式PCR技術將檢測P.lateralis基因組DNA的靈敏度提高到了1fg，效率提高了1萬倍，這對于靶標病原物的量非常低或存在PCR抑制物時非常重要。這表明該研究設計的引物具有很高的靈敏度。對發病植株進行檢測時，結合簡單的DNA提取方法使用特異引物T1/T2進行PCR擴增，一個工作日就可以判斷植物是否被P.lateralis侵染。使用NaOH裂解法可以在30分鐘之內即可得到病組織中病原菌的DNA用于PCR擴增，而使用傳統的方法檢測至少需要兩周，檢測時間大大縮短。
該研究建立的雪松疫霉根腐病菌檢測方法具有準確、快速、簡單易操作等優點，可以在病害侵染初期鑒定出病原物，可參考應用于出入境植物和植物產品的檢驗檢疫及田間調查，對控制雪松疫霉根腐病菌傳入我國具有重要意義。同時，該方法的建立也為其他病原菌的檢測提供了技術指導和理論依據。
（紀 睿）
《中國國門時報》
